Tipo de Articulo: Artículos Originales

Titulo: Clones de las clulas osteocticas MLO-Y4 tienen diferentes patrones de expresin gnica caractersticos de diferentes estados de diferenciacin osteoctica

Title: MLO-Y4 osteocytic cell clones express distinct gene expression patterns characteristic of different stages of osteocyte differentiation

Actual. Osteol 13(3):0, 2017

Autor(es): Emily G. Atkinson, Alejandro Marcial, Zulema Sanchez, Christian Porter, Lilian I. Plotkin


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Los osteocitos son las clulas ms abundantes del hueso y se forman cuando los osteoblastos se encuentran rodeados de matriz sea. A travs de cambios en la expresin

gnica y efectos paracrinos, los osteocitos controlan el nmero de osteoblastos que forman el hueso, y osteoclastos que resorben el hueso, clulas necesarias para mantener la masa sea. Las clulas MLO-Y4 son la lnea celular osteoctica ms investigada; sin embargo, no expresan esclerostina, el pro esclerostina, el producto del gen SOST que bloquea la formacin sea y es indispensable para la funcin de los osteocitos. Con el objetivo de aislar clones de las clulas MLO-Y4 con diferentes perfiles de expresin gnica, realizamos cultivos a muy baja densidad de las clulas transfectadas en forma estable con protena verde fluorescente nuclear (MLO-nGFP). La morfologa celular fue evaluada utilizando un microscopio de fluorescencia. Una vez que las clulas alcanzaron el 80% de confluencia, el ARN fue extrado y analizado por PCR cuantitativa en tiempo real.

Las clulas de los diferentes clones tienen diferentes tamaos y morfologa, algunas clulas son fusiformes y otras con proyecciones citoplasmticas abundantes y en forma de estrella. La expresin de los genes tambin vari en los distintos clones. Sin embargo, ninguno

de ellos expres SOST. En conclusin, los clones de las clulas MLO-nGFP constituyen una herramienta til para estudiar la diferenciacin de los osteocitos y el rol de estas clulas en el control de la formacin y resorcin sea in vitro.



Palabras clave: clulas osteocticas, expre osteocticas, expresin gnica, morfologa celular.

Osteocytes are the most abundant bone cell and are formed when osteoblasts become embedded in the bone matrix. Through changes in gene expression and paracrine effects, osteocytes regulate the number of osteoblasts, bone forming cells, and osteoclasts, bone resorbing cells, which are needed to maintain bone mass. MLO-Y4 is the better characterized osteocytic cell line; however, lacks expression of sclerostin, the product of the SOST gene, which is fundamental for osteocyte function and blocks bone formation. With the objective to isolate MLO-Y4 clones with different gene expression profiles, we performed cultures at very low density of MLO-Y4 cells stably transfected with nuclear green fluorescent protein (MLOnGFP). Cell morphology was visualized under a fluorescence microscope. Once the cells reached 80% confluency, RNA was extracted and quantitative real time PCR was performed.

Clones exhibit different sizes and morphology, with some cells showing a spindle-like shape

and others with abundant projections and a star-like shape. Gene expression also differed

among clones. However, none of the clones examined expressed SOST. We conclude that

the MLO-nGFP clones constitute a useful tool to study osteocyte differentiation and the role

of osteocytes in the control of bone formation and resorption in vitro.



Key words: osteocytic cells, gene expression, cell morphology.

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